支原体感染是一种
性传播疾病,可存在健康的人当中,为隐性基因。随着社会越来越开放,患病的人也在急剧上升中。那么,我们该如何诊断是否患有支原体感染呢?
支原体感染的诊断方法
1、采集标本
一般为泌尿生殖试子或刷片,少数取前列腺液,精液、关节液,或取输卵管,直肠活检物,近年来用初段尿标本离心物,以取代尿道拭子。拭子取材时,将拭子插入男性尿道2~4cm,用力擦取。该方法容易造成尿道损伤及继发感染。用时须慎重。女性则需先清洁宫颈鳞状与柱状上皮结合部,用细胞刷收集宫颈标本,能增加感染细胞的数量,较棉拭子敏感性高。
2、PCR扩增
传统的方法为的反应体积为100μl,含5x反应缓冲液20μl和FD~DNA聚合酶2μ、4种dNTP各200μmol/L以及引物对各25pmol/L。上述成分预先性分装于0.5ml离心管,~20℃备用。临用加模板DNA 2μl,短暂离心,加100μl矿物油覆盖。现在试剂已商品化,反应体积为25μl,单管已分装好,只要加入模板DNA即可。置DNA扩增仪进行40次循环扩增。每次循环包括90℃变性45s(次循环变性2min),55℃退火30s和72℃延伸40s(较后循环72℃,延伸5min)三个步骤。每次扩增均应作阴阳性对照。
3、扩增产物的检测
1.5%琼脂糖凝胶电泳检测:取10u l PCR扩增物作1.5%琼脂糖凝胶电泳、0.5μg/ml溴化乙锭染色,以PGEM~3Zf(+)DNA~Hae Ⅲ为分子量标准,置紫外透射仪观察结果。